ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中,背景深,全部呈有色(通常的Elisa背景值OD<0.2)
根據(jù)技術(shù)分析,可能存在的原因有一下幾條:
1、實(shí)驗(yàn)過(guò)程中洗滌不充分,洗后未拍干,樣品中其它成分殘留或酶標(biāo)記物殘留
解決辦法:洗液準(zhǔn)確配制;充分洗滌,靜置15秒,*拍干。加樣或加酶拍板的濾紙應(yīng)棄去不用,不要反復(fù)使用,否則易造成污染。
2、底物污染,未避光保存,出現(xiàn)顏色
解決辦法:棄去底物,重新配置
3、樣品稀釋液污染
解決辦法:棄去稀釋液,重新配置
4、吸頭重復(fù)使用,未洗凈或消毒不*
解決辦法:吸頭盡可能一次性使用
5、沒(méi)有正確封閉
解決辦法:在標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液中加入動(dòng)物蛋白或延長(zhǎng)封閉時(shí)間
6、樣本溶血嚴(yán)重
解決辦法:建議使用非溶血或輕微溶血樣本,嚴(yán)重溶血樣本會(huì)導(dǎo)致背景偏高。
7、不正確的孵育時(shí)間,溫度(尤其是底物孵育的時(shí)間)
解決辦法:zui為常用的溫育溫度有37℃和室溫,其次是43℃和2~8℃。*按照說(shuō)明書要求
8、偶聯(lián)抗體(streptavidin-HRP)濃度過(guò)高
解決辦法:按照說(shuō)明書調(diào)整到合適的濃度
9、ELISA板子不正確的貯存
解決辦法:酶標(biāo)板貯存于2-8 ℃;使用結(jié)合力低點(diǎn)的Elisa板